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17a-OH Progesterona

Procedimento de extração para amostra Neo Natal

Nota: A recuperação reportada para este método é de aproximadamente 85 - 90%.

 

Materiais Necessários:

 

·Padrão Zero fornecido juntamente com o kit.

·N-propanolol, grau HPLC.

·H-heptano, grau HPLC.

·Tubos cônicos para centrífuga de 5 mL, limpo em solução ácida.

·Gás nitrogênio

 Procedimento:

 

1.Prepare propanolol a 3% em solução de heptano (ex. 3 mL de propanolol para 100 mL de heptano).

2.Adicione ao tubo cônico: 300µL de amostra de soro + 3.0 mL de propanolol/heptano. Nota: A diluição pode ser ajustada se houver suspeita de que o valor da amostra está muito alto.

3.Tampe o tubo e inverta gentilmente e continuamente por 2 minutos.

4.Centrifugue a velocidade de aproximadamente 2000 rpm por 10 minutos.

5.Transfira 1.5 mL da fase orgânica para um tubo de vidro de 12x75 mm.

6.Evapore a fase orgânica sob um leve fluxo de gás nitrogênio.

7.Reconstituir o resíduo com 150µL do padrão zero (fornecido com o kit).

8.Proceda com o ensaio normalmente. A duplicata pode ser feita com o resíduo reconstituído. Não é necessário proceder à extração em duplicata.

 

  • Fonte: Lee A, Ellis G: Serum 17a-OH progesterone in infants and children as measured by a direct radioimmunoassay kit. Clinical Biochemistry 24:505-511, 1991.

Por: Sônia M.M.Fleira

Assessoria Científica