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IMUNOENSAIO QUANTITATIVO NO LIQUOR

O teste SERION Multianalyt ™ CSF IgG é um imunoensaio quantitativo fluorescente com base em citometria de fluxo para detecção de anticorpos humanos contra Virus de Sarampo, rubéola, varicela Zoster e Herpes 1 e 2 em soro, em plasma e em líquido cefalorraquidiano (LCR). O ensaio é recomendado para a determinação e diferenciação de processos inflamatórios no sistema nervoso central (SNC).

serion2.bmpImportância do Diagnóstico

Esta análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) permite a detecção e diferenciação de processos inflamatórios no sistema nervoso central (SNC). O diagnóstico preciso é importante para determinar se a doença (infecção) é causada pelo vírus ou devido a um processo inflamatório crônico (por exemplo, esclerose múltipla).
O diagnostico de sintomas neurológicos, suspeita de infecção do SNC ou processo inflamatório crônico é feito com base na determinação de anticorpos no LCR. No caso de uma infecção aguda
do SNC são produzidos anticorpos contra o patógeno responsável. Freqüentemente não é possível a detecção direta do agente patogênico no LCR (por exemplo, no caso de uma infecção por Borrelia) ou os ensaios são muito demorados. Métodos sorológicos são utilizados principalmente para o diagnóstico diferencial de uma infecção no SNC. Processos inflamatórios crônicos do SNC podem resultar na ativação de uma resposta imune poliespecífica. Nesses casos, anticorpos específicos contra diferentes patógenos virais podem ser detectados, apesar dos respectivos agentes não serem responsáveis pela doença. Análise do LCR por si só, não é suficiente para determinação de anticorpos. Além disso, outros fatores devem ser levados em conta. A passagem de grandes moléculas e células do sangue arterial pela barreira hemato-encefálica e LCR é muito limitada devido às propriedades de permeabilidade nas paredes vasculares.

Como conseqüência da característica molecular particular, amino ácidos, açúcares e proteínas têm variedades de requerimentos para transferência pela barreira hemato-encefálica. No entanto, a permeabilidade das proteínas é em função de seu tamanho. Como conseqüência, sob condições normais, a concentração total de proteínas do líquido céfalo-raquidiano (LCR) é aproximadamente 1% do correspondente no soro.

Se a barreira hemato-encefálica estiver comprometida, as concentrações de proteínas no LCR podem aumentar quando comparadas ao normal.

Anticorpos encontrados no LCR podem ter origem no plasma, adentrando o LCR por difusão, ou serem sintetizados dentro do próprio LCR. A determinação da síntese de um anticorpo é possível somente por quantificação simultânea da faixa de proteínas no LCR assim como o correspondente no soro. Contudo, o quociente LCR/soro e o índice de anticorpo (IA) são determinados de acordo com um esquema de cálculo desenvolvido por Hansotto Reiber. Isto é feito pelos testes ELISAs quantitativos, ou alternativamente, pelo uso do SERION MultianalytTM CSF IgG, para que seja detectado os anticorpos IgG contra Virus Sarampo, Rubeola, Varicella-Zoster e Herpes Simplex Virus 1 e 2 simultâneamente. Um software de avaliação facilita o cálculo do Indice de anticorpos (IA) de acordo com Reiber (veja Reiber and Peter, 2001)

Validação do

SERION MultianalytTM CSF IgG.

A eficiência do diagnóstico do SERION MultianalytTM CSF IgG foi determinada por análise de 90 pares soro/LCR.para cada componente do imunoensaio individualmente O teste ELISA de um importante fabricante Europeu foi usado como referência.

Patógeno

Proporção de resultados concordantes

Proporção de resultados diferentes

Sarampo

86 / 95 (91%)

9 / 95 (9%)

Rubéola

86 / 94 (91%)

8 / 94 (9%)

VZV

86 / 89 (91%)

8 / 89 (9%)

HSV 1/2

86 / 90 (91%)

8 / 90 (9%)

Precisão

 

A precisão intra e inter testes foi determinada pela análise de amostras de soro com diferentes reatividades.

 

SERION MultianalytTM CSF IgG (amostra de soro)

Parâmetro

Intensidade do Sinal (MFI)

Intra Ensaio CV(%)     (n=20)

Intensidade do Sinal (MFI)

Inter EnsaioCV(%) (n=10)

Sarampo

316,1

9,7

309,1

6,1

Rubéola

661,9

9,1

661,5

6,6

VZV

477,4

10,6

470,6

7,0

HSV 1/2

416,5

8,2

406,7

6,6

SERION MultianalytTM CSF IgG (amostra de LCR)

 

Parâmetro

Intensidade do Sinal (MFI)

Intra Ensaio CV(%) (n=20)

Intensidade do Sinal (MFI)

Inter Ensaio CV(%) (n=10)

Sarampo

174,5

11,4

159,0

3,8

Rubéola

338,9

10,9

368,8

2,8

VZV

124,2

12,1

131,2

3,5

HSV 1/2

114,6

11,2

118,7

3,5

A determinação de múltiplos parâmetros em uma amostra de volume bem pequeno poupa tempo e trabalho e sustém significantemente o diagnóstico e é melhor que elaborar ensaios individuais para determinação de cada anticorpo específico.