Multi-AGP - EIA

Este kit é um método de screening para a detecção simultânea de 5 Promotores de Crescimento Antibacteriano (AGPs) proibidos. 

Drogas antibacterianas utilizadas como promotores de crescimento são adicionadas a rações de rebanhos e todas criações a níveis subterapêuticos por longo período de tempo. Este procedimento é regulamentado pelo Concílio Diretivo 70/524/EEC <1>.

Resíduos de promotores de crescimento antibacteriano (AGPs) em alimentos pode levar a reações alérgicas. Porém, o risco maior está relacionado com o desenvolvimento de bactérias resistentes, o que pode causar respostas inadequadas em  tratamentos com drogas normais em humanos. Desta forma, a Comissão Européia decidiu banir alguns promotores de crescimento. Com o Concílio Regulatório 2821/98 <2> bacitracina de zinco , espiramicina, tilosina e virginiamicina, e com a Comissão Regulatória 2788/98 <3> olaquindox, estes antibióticos foram banidos das rações de animais.

O método de screening multi-AGP desenvolvido no projeto "Feedstuffs-RADIUS" é um enzima imunoensaio competitivo (EIA) para o rastreamento simultâneo de cinco promotores de crescimento antibacteriano banidos das rações de animais: virginiamicina, spiramicina, bacitracina de zinco , tilosina e olaquindox. Tanto o desenvolvimento quanto a validação deste kit foi realizada de acordo com a Decisão da Comissão 2002/657/EC <4>.

O kit multi-AGP EIA é um teste em microplaca combinado com uma simples preparação das amostras a qual envolvve procedimento simples de extração. 

Neste ensaio competitivo multi-AGP EIA, as cavidades da microplaca são recobertas anticorpos policlonais de coelho específicos para um dos 5 promotores de crescimento antibacteriano banido, ex. virginiamicina (cavidades vermelhas), espiramicina/tilosina (cavidades amarelas), bacitracina de zinco (cavidades verdes) e olaquindox (cavidades azuis).

AGPs presente nos controles ou amostras competem para se ligarem aos anticorpos, conjugados a peroxidase de rábano (HRPO). Após incubação, é adicionado o substrato. A reação é interrompida com a adição de ácido sulfúrico. A intensidade de cor obtida nas cavidades é dosada em espectrofotômetro a 450 nm. O sinal medido é inversamente proporcional a concentração de AGP nas amostras de soro ou controles. 

A capacidade de detecção do kit multi-AGP EIA é de 2 mg/kg para olaquindox e 0.5 mg/kg para os outros antibióticos incluídos no projeto.

Referências

<1> Commission of the European Communities
Council Directive 70/524/EEC
Official Journal of the European Communities, L270, 1-17,(1994)
 
<2> Commission of the European Communities
Council Regulation 2821/98
Official Journal of the European Communities, L351, 4-8 (1998)

<3> Commission of the European Communities
 Commission Regulation 2788/98
 Official Journal of the European Communities, L347, 31-32 (1998)

<4> Commission of the European Communities
Commission Decision 2002/657/EC
Official Journal of the European Communities, L221, 8-36 (2002)

<5> C.T. ELLIOTT, QUB
A Final Report of the Performance of a Multi-antibiotic ELISA Procedure Developed as part of the Feedstuffs-RADIUS QLK-CT-2000-00900

 Instruções de Uso